ATCC細(xì)胞的具體計(jì)數(shù)操作教學(xué)

發(fā)布時(shí)間： 2021-06-17　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1319次

　　當(dāng)待測(cè)ATCC細(xì)胞懸液中細(xì)胞均勻分布時(shí)，通過(guò)測(cè)定一定體積懸液中的細(xì)胞的數(shù)目，即可換算出每毫升細(xì)胞懸液中細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)目。

　　具體計(jì)數(shù)的操作如下：

　　1.將計(jì)數(shù)板及蓋片擦拭干凈，并將蓋片蓋在計(jì)數(shù)板。

　　2.將ATCC細(xì)胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿(mǎn)蓋片和計(jì)數(shù)板之間，靜置3min，注意蓋片下不要有氣泡，也不能讓?xiě)乙毫魅肱赃叢壑小?/div>

　　3.計(jì)算板四大格細(xì)胞總數(shù)，壓線細(xì)胞只計(jì)左側(cè)和上方的。然后按公式計(jì)算：

　　細(xì)胞數(shù)/mL=四大格細(xì)胞總數(shù)/4×104。

　　說(shuō)明：公式中除以4，因?yàn)橛?jì)數(shù)了4個(gè)大格的細(xì)胞數(shù)。公式中乘以104因?yàn)橛?jì)數(shù)板中每一個(gè)大格的體積為：

　　1.0mm（長(zhǎng)）×1.0mm（寬）×0.1mm（高）=0.1mm³，而1ml=1000mm³。

　　注意：鏡下偶見(jiàn)有兩個(gè)以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)，應(yīng)按單個(gè)細(xì)胞計(jì)算，若細(xì)胞團(tuán)10%以上，說(shuō)明分散不好，需重新制備細(xì)胞懸液。

　　ATCC細(xì)胞計(jì)數(shù)要點(diǎn)：

　　1.進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，要求懸液中細(xì)胞數(shù)目不低于1×107 L-1，如果細(xì)胞數(shù)目很少要進(jìn)行離心再懸浮于少量培養(yǎng)液中。

　　2.要求細(xì)胞懸液中的細(xì)胞分散良好，否則影響計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性。

　　3.取樣計(jì)數(shù)前，應(yīng)充分混勻細(xì)胞懸液，尤其時(shí)多次取樣計(jì)數(shù)時(shí)更要注意每次取樣都要混勻，以求計(jì)數(shù)準(zhǔn)確。

　　4.數(shù)細(xì)胞的原則是只數(shù)完整的細(xì)胞，若細(xì)胞聚集成團(tuán)時(shí)，只按照1個(gè)細(xì)胞計(jì)算。如果細(xì)胞壓在格線上時(shí)，則只計(jì)上線，不計(jì)下線，只計(jì)右線，不計(jì)左線。

　　5.操作時(shí)，注意蓋片下不能有氣泡，也不能讓?xiě)乙毫魅肱赃叢壑?，否則要重新計(jì)數(shù)。